一、实验目的
1. 学会使用亚甲基蓝作为指示剂，通过褪色时间检测酵母菌细胞代谢速率（以无氧呼吸强度为指标）的简易方法。
2. 探究温度、葡萄糖浓度等因素对酵母菌细胞代谢速率的影响。
3. 提升实验操作、观察记录及分析生物学现象的能力。
二、实验原理
亚甲基蓝是一种活体染色剂，氧化态呈蓝色，还原态无色。酵母菌在进行无氧呼吸（酒精发酵）过程中会产生还原剂[H]，能将进入活细胞内的氧化态亚甲基蓝还原成无色。细胞代谢越旺盛，产生的还原氢越多，蓝色褪去所需时间越短。通过测量相同条件下亚甲基蓝褪色时间的长短，可以间接比较细胞代谢速率的快慢。
三、实验材料与仪器
新鲜活性干酵母、质量分数为5%和10%的葡萄糖溶液、0.01%亚甲基蓝溶液、蒸馏水、试管、恒温水浴锅（或大烧杯与温度计）、试管架、滴管、记号笔、秒表。
四、实验步骤
（一）温度对细胞代谢速率的影响
1. 配制酵母菌培养液：取3支洁净试管，编号1、2、3，各加入2mL 5%葡萄糖溶液。每支试管中加入等量（约0.1g）新鲜活性干酵母，用玻璃棒搅拌使其充分混匀形成悬浊液。
2. 设置温度处理：将1号试管置于0-5℃冰水浴中，2号试管置于37℃恒温水浴中，3号试管置于70℃以上热水浴中。所有试管静置预热或预冷5分钟。
3. 染色与计时：向每支试管中各滴加2滴0.01%亚甲基蓝溶液，轻轻摇匀，立即开始用秒表计时。
4. 观察记录：持续观察各试管中溶液蓝色的变化，记录从加入亚甲基蓝到蓝色完全褪去（以肉眼观察蓝色消失为准）所需的时间（秒）。若超过10分钟未褪色，则停止计时并记录“>600秒”。
（二）葡萄糖浓度对细胞代谢速率的影响（在37℃最适温度下进行）
1. 取3支洁净试管，编号A、B、C。
2. 分别向A、B、C试管中加入2mL蒸馏水、2mL 5%葡萄糖溶液、2mL 10%葡萄糖溶液。
3. 各试管中加入等量活性干酵母，混匀后置于37℃水浴中保温5分钟。
4. 各滴加2滴亚甲基蓝溶液，计时并记录蓝色完全褪去所需时间。
五、实验结果记录与分析
设计表格记录不同条件下亚甲基蓝褪色时间。分析数据，得出结论：在一定范围内，随着温度升高（至最适温度），酵母菌代谢速率加快，褪色时间缩短；温度过高（如70℃）使酶失活，代谢停止。在适宜温度下，提供更高浓度的葡萄糖（在未达抑制浓度前），代谢速率加快。
六、注意事项
1. 各试管中加入的酵母量、葡萄糖液体积、亚甲基蓝滴数必须严格保持一致，遵循单一变量原则。
2. 滴加亚甲基蓝后应轻轻摇匀，使染料与培养液充分接触，但避免剧烈震荡。
3. 观察褪色时，以试管背衬白纸观察颜色变化为准，判定终点需统一标准。
4. 热水浴温度不宜过高，以防烫伤及试管破裂。
板书设计
课题：细胞代谢速率的简易检测与影响因素探究
一、原理：亚甲基蓝（氧化型蓝→还原型无）+ [H] → 褪色快慢反映代谢强弱
二、变量探究
1. 温度：低温→慢；适温→快；高温→失活
2. 底物浓度（葡萄糖）：适度升高→加快
三、关键操作
1. 等量原则
2. 预保温
3. 同步计时
四、结论：代谢速率受温度、底物浓度等环境因素影响。