1. 细胞培养系列
无菌操作：超净台使用、枪头/培养基预热、酒精消毒。口诀：“进台先消毒，东西别堵口，动作快准轻，随时关风口。”
细胞传代：消化时间掌握（镜下观察，变圆即停）、终止消化、离心转速与时间。关键点：“胰酶消化看形态，不要按死时间来。”
细胞计数与铺板：台盼蓝染色判死活、计数板计算、均匀铺板。套路句式：“我通常用双复孔计数取平均值，按存活率XX%计算，以X万/孔的密度铺于X孔板。”
细胞冻存与复苏：程序降温盒（或逐步降温）、快速复苏、DMSO浓度。高频考点：“慢冻快融”，复苏后次日必须换液。
2. 核酸相关实验
细胞总RNA提取：防RNase污染（焦碳酸二乙酯水、酒精擦拭）、匀浆充分、及时测浓度纯度。硬核信息：“260/280比值1.8-2.0，260/230＞2.0，电泳看三条带。”
质粒提取（转化/抽提）：挑取单克隆、提质粒后测浓度、双酶切鉴定。答题技巧：“面试问流程，重点提‘摇菌后使用试剂盒按说明书操作，最后用核酸仪和电泳验证’。”
3. 蛋白相关实验
细胞总蛋白提取：裂解液选择（RIPA）、蛋白酶/磷酸酶抑制剂、冰上操作。知识点：“全程低温，裂解后高速离心取上清，分装存-80°C。”
Western Blot：制胶、上样量均一、转膜条件（“三明治”结构、恒流）、抗体孵育。高频坑点：“内参要跑好，曝光别过饱和，膜务必全程保湿。”
免疫荧光/免疫组化：细胞爬片、固定通透、封闭、一抗二抗孵育、封片看结果。核心操作：“避光！防干！设对照！”
4. 功能实验
MTT/CCK-8：铺板密度均一、设置复孔、加药时间点、酶标仪读数。模板句式：“设置空白对照、阴性对照、阳性对照和实验组，每组至少3个复孔，结果用GraphPad Prism计算IC50。”
划痕实验：划痕均一直线、PBS清洗脱落细胞、定时定点拍照。关键：“划完拍0小时，保证各孔起点一致。”
Transwell（迁移/侵袭）：基质胶铺胶（侵袭实验）、细胞悬浮液无血清、固定染色计数。对比：“迁移实验无基质胶，侵袭实验有，其余步骤类似。”
5. 必须知道的仪器
倒置显微镜：看细胞形态、密度、污染。
生物安全柜/超净工作台：区别是生物安全柜保护人和样品，超净台只保护样品。
离心机：转速换算（g vs rpm）、配平。
电泳仪/转膜仪：恒压恒流选择。
酶标仪/化学发光成像系统：原理不同，一个测吸光度，一个捕获光信号。
面试常问的“必须掌握”套路问题
“如果细胞污染了（细菌/真菌/支原体）怎么办？” 答：“立即废弃，彻底消毒操作台和培养箱，复苏新的细胞株。支原体污染用特效清除剂或直接丢弃。”
“WB条带位置不对/背景高怎么办？” 答：“先看内参，确认上样量和转膜是否正常；背景高增加封闭时间、优化洗膜条件。”
“实验重复不出来怎么办？” 答：“回顾实验记录，核对试剂批次、细胞代数、操作细节；设立阳性对照，分步排查。”
拿来就能用的高频考点
培养基加双抗（防细菌），但做转染等关键实验前必须停用。
冻存细胞用胎牛血清，复苏用完全培养基。
细胞传代不能长太满（一般80-90%），影响状态。
所有涉及细胞的步骤，除非注明，否则都在37°C、5% CO₂培养箱进行。